miRNA分離純化試劑盒在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于miRNA/RNA吸附柱上，再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心洗脫得到純凈的miRNA/RNA。無(wú)苯酚、氯仿DNA/RNA快速提取技術(shù)基礎(chǔ)上配合分離技術(shù)同時(shí)得到的miRNA/RNA/基因組DNA純度高，互不干擾。得到的miRNA/RNA不需要DNase消化，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。基因組DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各種試驗(yàn)。
使用方法：
1.在純化好的100μL總RNA(含大RNA和小RNA)中，加入50μL溶液A，振蕩30秒混勻。如果RNA樣品體積不足100μL，可以用RNase-free水補(bǔ)足，如果體積超過(guò)100μL，可以用本公司核酸濃縮劑濃縮到100μL。
2.室溫12000～15000g離心30分鐘。小RNA在上清中，大RNA在沉淀中。
注意：離心時(shí)間不能短于30分鐘，否則大RNA沉淀不充分。
3.小心將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5mLRNase-free塑料離心管中。留下的沉淀可以用75%乙醇洗滌后做大RNA電泳對(duì)照用。
4.在上清液中加入200μL溶液B，振蕩30秒混勻。
5.室溫12000～15000g離心10分鐘，小心棄上清。由于溶液B中有惰性的助沉劑，所以得到的小RNA沉淀肉眼可見(jiàn)。
6.加入1mL溶液C，震蕩數(shù)秒。
7.室溫12000～15000g離心10分鐘，小心棄上清。
8.短暫離心數(shù)秒，小心吸棄殘留液體(約50μL左右)。
9.在沉淀中(含小RNA)加入30～100μLRNase-free水，吹打溶解即得小RNA溶液。注意：不能只吹打管底部分，還需要吹打整個(gè)離心管管壁的離心面部分，因?yàn)樯厦嬉灿杏行NA沉淀。
10.最好先PAGE-銀染檢測(cè)小RNA純度再使用。
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